Pasteuri pipeti tööpõhimõte põhineb peamiselt gravitatsioonil{0}}juhitaval voolul ja kapillaartegevusel, mis on kombineeritud õhurõhu erinevuste käsitsi juhtimisega, et hõlbustada vedelike aspireerimist ja ülekandmist.
Käsitsi imemise juhtimine: operaator imeb pipeti laiale otsale -kas suuliselt või kummist lisapirni abil-, et tekitada torus alarõhu, tõmmates seeläbi vedeliku peenesse otsa.
Gravitatsiooni{0}}juhitav doseerimine: kui imemine vabaneb, voolab vedelik gravitatsiooni mõjul loomulikult välja; väljastamist saab aidata ka pipeti korpust õrnalt pigistades või vastuvõtuanumat kallutades.
Piiskade reprodutseeritavus: Kalibreerides suhet "tilgad milliliitri kohta", võimaldab pipett ligikaudset kvantitatiivset ülekandmist, muutes selle sobivaks protseduurideks, mis nõuavad pigem korratavust kui absoluutset täpsust.
Steriilsuse tagamine: enne kasutamist saab vatitiku laiemasse otsa sisestada ja steriliseerida, et vältida mikroobset saastumist käsitsemise ajal-, mis on eriti levinud mikrobioloogilistes katsetes.